基因型

F- λ- fhuA2[lon] ompT lacZ::T7gene1 gal sulA11Δ(mcrCmrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]

簡要說明

ER2566菌株是NEB公司開發(fā)的具有超高轉(zhuǎn)化效率的蛋白表達原核菌株，來源于BL21。Lac啟動子啟動下游T7RNA聚合酶的表達，可用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達。fhuA2賦予ER2566菌株對噬菌體T1的抗性。同時ER2566為lon和 ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效抑制表達的異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解，Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突變的存在使ER2566菌株無法對外源DNA進行標記、限制，提高了外源甲基化DNA的轉(zhuǎn)化效率。AngYuBio High5TM系列ER2566感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達109 cfu/μg DNA。

操作說明

1、取100μl冰上融化的ER2566感受態(tài)細胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1、取100μl冰上融化的ER2566感受態(tài)細胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。