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當前位置:首頁   >  產(chǎn)品中心  >  Abnbio感受態(tài)細胞  >  表達 感受態(tài)細胞  >  ABG226-50ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細胞

ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細胞

簡要描述:ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細胞 保存條件:-80℃ 基因型E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+
TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]pRARE2(CamR)

  • 產(chǎn)品型號:ABG226-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:414

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG226-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細胞應用領(lǐng)域環(huán)保,食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]pRARE2(CamR)


簡要說明

ArcticExpress (DE3) pRARE2來源于ArcticExpress (DE3),將具有l(wèi)u霉素抗性的pRARE2質(zhì)粒導入ArcticExpress (DE3)細胞中即是ArcticExpress(DE3)pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū),使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同時表達T7RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。ArcticExpress (DE3)pRARE2菌株具有四環(huán)素,qing大霉素,lu霉素抗性,endA1突變有利于質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress(DE3)pRARE2可以表達適應低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性,在ArcticExpress(DE3) pRARE2細胞中表達時,可降低重組蛋白包涵體的形成,增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性,比傳統(tǒng)的原核表達伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優(yōu)異的促融能力。同時,pRARE2質(zhì)粒可補充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應的tRNA,提高外源基因的表達水平。ArcticExpress(DE3) pRARE2感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達108cfu/µg DNA。


操作說明

1、ArcticExpress (DE3) 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒,并用手撥EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率

3. 向離心管中加入700 µl不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 µl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上(平板中務必同時含有34µg/ml的lu霉素,40µg/ml的qing大霉素和轉(zhuǎn)化質(zhì)粒本身的篩選抗生素;若質(zhì)粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒,并用手撥EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3. 向離心管中加入700 µl不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 µl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上(平板中務必同時含有34µg/ml的lu霉素,40µg/ml的qing大霉素和轉(zhuǎn)化質(zhì)粒本身的篩選抗生素;若質(zhì)粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。












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